用酶底物法檢測儀器檢測臟水中的大腸菌群時需要先稀釋到100倍甚至1000倍才能檢測出。而且微生物實驗不穩(wěn)定,當(dāng)我們進(jìn)行稀釋時,結(jié)果固然會有影響,我們要做的就是盡量減少誤差。那么為什么要用酶底物法檢測儀器來檢測臟水?
1、實驗步驟越少,結(jié)果偏差也會越小。所以酶底物法步驟少,會更有優(yōu)勢。
2、在做稀釋時,應(yīng)保證取樣量大。譬如10倍稀釋:取10ml原液+90ml無菌水配成100ml10倍稀釋液①;若是要百倍千倍稀釋,則需要進(jìn)行梯度稀釋,由①中的10倍稀釋樣再取10ml,再加90ml無菌水,此時完成了100倍的稀釋。若是千倍稀釋,則需要從100倍稀釋樣中再取10ml進(jìn)行稀釋。
3、每次再去原液時,取樣的均勻程度直接影響了后面的稀釋結(jié)果,故我們在每次取樣前必須充分搖勻。
4、為了使數(shù)據(jù)更加地穩(wěn)定及接近真實值,建議每個梯度稀釋做平行樣。這時,我們可以設(shè)計成取20ml原液加180ml無菌水配成200ml樣或者取30ml加270ml無菌水配成300ml10倍稀釋樣,以此往下做梯度稀釋。若是未知樣且濃度可能會很高的時候,我們建議這樣去稀釋,因為這樣我們便可以保證每個梯度至少有一個樣。若已經(jīng)大概了解水樣來源及濃度,可直接梯度稀釋到我們要的濃度,并做2-3個平行樣。
5、對于未知樣需要進(jìn)行濃度的摸索,無論是多管還是酶底物法,都會有較大工作量。前期的梯度稀釋及每個梯度做平行樣都是無法避免的,當(dāng)我們后期對水樣濃度有了把握后便可以直接稀釋到某個濃度,這樣就減少許多的工作量了。
由于酶底物法是已滅菌可直接用的選擇性培養(yǎng)基,比起多管法會更加簡便、不用洗大量的管子。另外濾膜法在做臟水時就完全不適合了。